Наборы реагентов для синтеза кДНК и RACE-анализа

Cells-to-cDNA™ II
Набор реагентов предназначен для приготовления кДНК из культуры клеток млекопитающих менее чем за 2 часа без выделения РНК.

Основные характеристики:

• Не требует очистки РНК;
• Возможность выполнения обратной транскрипции при малом и большом количествах клеток;
• Инактивация эндогенных РНКаз и обработка ДНКазой I (полное удаление геномной ДНК);
• Новый буфер для лизиса клеток не инактивирует и не ингибирует ферментативные реакции;
• Совместимость с одно и двух шаговыми протоколами;
• Простота протокола.

Набор рассчитан на проведение 40 (каталожный номер АМ1722) или 100 (каталожный номер АМ1723) реакций обратной транскрипции. Включает M-MLV обратную транскриптазу, праймеры – Oligo (dT)₁₈ и Random Decamers, контрольную РНК (Armored RNA® control) и дополнительные праймеры.

В состав набора не входит ДНК-полимераза, которую можно приобрести дополнительно:

1) ДНК-полимераза SuperTaq™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2050 (50 единиц) или каталожный номер AM2052 (250 единиц);
2) ДНК-полимераза SuperTaq™ Plus™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2054 (50 единиц) или каталожный номер AM2056 (250 единиц).

Кроме того дополнительно можно приобрести Лизирующий буфер Cells-to-cDNA™ II Cell Lysis Buffer (10 ml в бутылке) – каталожный номер AM8723 (5 бутылок в упаковке).

High Capacity RNA-to-cDNA Kit – каталожный номер 4387406
Набор реагентов для проведения обратной транскрипции разработан для достижения оптимальной эффективности и производительности анализа экспрессии генов в реальном времени при использовании с TaqMan® Gene Expression Master Mix, Power SYBR® Green PCR Master Mix и др.

Основные характеристики:

• Широкий динамический диапазон: возможность исследование низко и высоко экспрессирующихся генов;
• Короткое время обратной транскрипции (0.5 – 1 час);
• Легкий технологический процесс;
• Оптимизированный 2-х этапный протокол, уменьшение вероятности ошибок при раскапывании;
• Чувствительность и специфичность;
• Высокая производительность.

Набор реагентов содержит 2x RT Buffer (содержит dNTPs) и 20x Enzyme mix (содержит ингибитор РНКаз) и рассчитан на проведение 50 реакций.
Имеются протокол (каталожный номер 4387951) и быстрая справочная карта (каталожный номер 4392339) проведения эксперимента.

High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit
Набор реагентов содержит все необходимые компоненты для количественного переведения от 0.02 до 2 мкг тотальной РНК в одно-цепочечную кДНК в одной реакции объемом 20 мкл.

Основные характеристики:

• Более высокие производительность, линейность и точность;
• Набор реагентов протестирован на широком диапазоне матриц, включая сложные образцы РНК (GC- и AU- богатые последовательности);
• Возможные дальнейшие приложения: ПЦР, ПЦР в реальном времени и microarrays-анализ.

1) 200 реакций – каталожный номер 4368814 (с ингибитором РНКаз – каталожный номер 4374966);
2) 1000 реакций – каталожный номер 4368813 (с ингибитором РНКаз – каталожный номер 4374967).
Имеется протокол (каталожный номер 4375575) проведения эксперимента.

High Capacity RNA-to-cDNA Master Mix
Набор реагентов оптимизирован для приготовления кДНК для анализа экспрессии генов в реальном времени и предназначен для лабораторий с высокой производительностью.

Основные характеристики:

• Формат готовой реакционной смеси (одна пробирка) позволяет уменьшить вероятность ошибок при раскапывании;
• 5x-концентрация обеспечивает надежные результаты даже с разведенными образцами РНК (до 2.5x-разведения), а также с редкими и богатыми транскриптами;
• Жидкий формат при температуре минус 10 – минус 20 °С устраняет циклы замораживания/оттаивания и максимизирует стабильность реакционной смеси;
• Дополнительный формат “No RT Control” для валидации анализов;
• Широкий динамический диапазон (от 1 пг до 1 мкг тотальной РНК в реакцию объемом 20 мкл);
• Более высокая эффективность для редких транскриптов (более низкие значения CT);
• Непревзойденная точность синтеза кДНК;
• Высокая производительность;
• Различный формат реакционной смеси.

1) 15 реакций – каталожный номер 4390776 (“No RT Control” – каталожный номер 4390710);
2) 50 реакций – каталожный номер 4390777 (“No RT Control” – каталожный номер 4390711);
3) 200 реакций – каталожный номер 4390778 (“No RT Control” – каталожный номер 4390712);
4) 500 реакций – каталожный номер 4390779 (“No RT Control” – каталожный номер 4390713);
5) Четыре 96-ти луночные плашки (384 реакции) – каталожный номер 4390780.
Имеются протокол (каталожный номер 4377474) и быстрая справочная карта (каталожный номер 4389468) проведения эксперимента.

SuperScript® VILO™ cDNA Synthesis Kit
Набор реагентов разработан для увеличения выхода кДНК и увеличения динамического диапазона экспериментов. Содержит SuperScript® III RT, рекомбинантный ингибитор рибонуклеаз RNaseOUT™ и белок-помощник SuperScript® VILO™, способствующие уменьшению ингибирования реакции и увеличению выхода кДНК.

• Получение одинаковых относительных данных о кДНК независимо от уровня экспрессии интересующего гена;
• Большая точность: уменьшение необъективности при исследовании низко и высоко экспрессирующихся генов;
• Воспроизводимые результаты: надежный анализ большого количества генов;
• Уменьшение ингибирования количественной ПЦР: возможность использования большего количества кДНК при проведении количественной ПЦР для увеличения чувствительности в 4 раза без риска ингибирования реакции;
• Увеличение выхода кДНК: возможность сохранения кДНК для дальнейших исследований.

1) 50 реакций по 20 мкл – каталожный номер 4453650;
2) 250 реакций по 20 мкл – каталожный номер 4453651.

RETROscript® First Strand Synthesis Kit for RT-PCR – каталожный номер AM1700 (набор рассчитан на проведение 40 реакций)
Набор реагентов предназначен для приготовления кДНК на матрице РНК. В состав набора входят 2 альтернативных буфера: 10х RT-PCR буфер может использоваться как для обратной транскрипции, так и для амплификации при применении одно и двух шаговых протоколов; 10X First-Strand буфер максимизирует выход кДНК при проведении реакции обратной транскрипции. Кроме того в состав набора входят обратная транскриптаза M-MLV, праймеры Random Decamers и Oligo (dT), контрольная РНК и праймеры для положительного контроля, High Resolution Gel Loading Solution (эффективен для разделения коротких фрагментов ≤ 500 пар оснований), а также протоколы проведения одно и двух шаговых экспериментов.

В состав набора не входит ДНК-полимераза, которую можно приобрести дополнительно:
1) ДНК-полимераза SuperTaq™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2050 (50 единиц) или каталожный номер AM2052 (250 единиц);
2) ДНК-полимераза SuperTaq™ Plus™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2054 (50 единиц) или каталожный номер AM2056 (250 единиц).
Кроме того дополнительно можно приобрести T7-Oligo(dT)24V Promoter Primer (100 нгр/мкл) – каталожный номер AM5712 (40 реакций).

FirstChoice® RLM-RACE Kit – каталожный номер AM1700
Набор реагентов представляет собой важное улучшение классического RAGE-протокола (основан на ПЦР, предназначен для облегчения клонирования последовательностей с 5’-конца).

Основные характеристики:

• Получение специфического продукта даже для редких транскриптов;
• Получение только полноразмерной мРНК*;
• Все шаги протокола оптимизированы (выполнение исследования за 5 часов).
  *Полноразмерная мРНК отбирается от тотальной РНК или поли(А)-РНК за счет обработки CIP (кишечная фосфатаза теленка), которая удаляет 5’-фосфаты из всех молекул, содержащих свободные 5’-фосфаты (рибосомная РНК, тРНК, фрагментированная мРНК, РНК, загрязненная геномной ДНК), не затрагивая полноразмерную мРНК. Затем РНК обрабатывается TAP (пирофосфатаза табака), которая удаляет все cap-структуры из полноразмерной мРНК, содержащей 5’-монофосфаты. Синтетический адаптер лигируется только с полноразмерной мРНК, содержащей 5’-фосфаты и не содержащей cap-структур. Затем проводится реакция обратной транскрипции со случайными праймерами и неспецифическая nested-ПЦР для амплификации 5’-специфических транскриптов.

Набор рассчитан на проведение 100 реакций и содержит: реагенты и ферменты для приготовления 5’-RAGE кДНК, праймеры и адаптеры для проведения RAGE (5’ и 3’), праймеры для проведения nested-ПЦР, а также контрольную РНК и праймеры для тестирования производительности набора реагентов.

В состав набора не входит ДНК-полимераза, которую можно приобрести дополнительно:
1) ДНК-полимераза SuperTaq™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2050 (50 единиц) или каталожный номер AM2052 (250 единиц);
2) ДНК-полимераза SuperTaq™ Plus™ (5 ед/мкл) – каталожный номер AM2054 (50 единиц) или каталожный номер AM2056 (250 единиц).

Праймеры и dNTP

Random Hexamers (50 mM) – каталожный номер N8080127
Короткие олигонуклеотиды со случайной последовательностью [d(N)6] отжигаются в случайных сайтах ДНК или РНК, выступают как праймеры для синтеза ДНК ДНК-полимеразой или обратной транскриптазой.

Oligo d(T)16 (50 mM) – каталожный номер N8080128
Гомоолигомерные дезоксирибонуклеотиды используются для праймирования и обратной транскрипции полиаденилированной РНК.

Праймеры для синтеза первой цепи кДНК при ОТ-ПЦР
Такие же праймеры используются в наборе реагентов RETROscript® First Strand cDNA Synthesis Kit.
1) Random Decamers (50 µM) – каталожный номер AM5722G;
2) Oligo (dT) Primer (50 µM) – каталожный номер AM5730G

dNTPs – каталожный номер AM8200
Высококачественные дезоксинуклеотидтрифосфаты для синтеза кДНК (10мM). Такие же dNTPs используются в наборе реагентов RETROscript® First Strand cDNA Synthesis Kit.

Обратные транскриптазы

M-MLV
Обычно используется для проведения ОТ-ПЦР с применением одношагового протокола. Поставляется с оптимизированным буфером (10X First Strand Synthesis Buffer).
1) 4000 единиц (100 ед/мкл) – каталожный номер AM2043;
2) 10000 единиц (100 ед/мкл) – каталожный номер AM2044

RNase Inhibitor and MuLV Reverse Transcriptase
RNase Inhibitor (2000 единиц, 20 ед/мкл) – каталожный номер N80800119
RNase Inhibitor – 50 кДа ремонмбинантный фермент ингибирует действие РНКаз, предотвращает деградацию РНК, не обладает ДНКазной или эндонуклеазной активностями.
Обратная транскриптаза MuLV (5000 единиц, 50 ед/мкл) каталожный номер N80800118

MultiScribe™ Reverse Transcriptase – каталожный номер 4311235 (5000 единиц, 50 ед/мкл)
Рекомбинантная обратная транскриптаза MoMuLV похожа на обратную транскриптазу MuLV, однако имеет другие рекомендованные условия употребления. Подходит для проведения ОТ-ПЦР с применением одно и двухшаговых протоколов.

ArrayScript™
Модицифированная M-MLV обратная транскриптаза обеспечивает в два раза более высокий выход кДНК при синтезе кДНК на матрице РНК при малых количествах РНК (≈ 100 нг) по сравнению с другими обратными транскриптазами. Поставляется с оптимизированным буфером (10x Reaction Buffer).
1) 4000 единиц (200 ед/мкл) – каталожный номер AM2048;
2) 10000 единиц (200 ед/мкл) – каталожный номер AM2049

HIV Reverse Transcriptase – каталожный номер AM2045 (500 единиц, 10 ед/мкл)
Обратная транскриптаза HIV представляет собой гетеродимерный белок (51 и 66 кДа субъединицы), является более термостабильной, чем обратные транскриптазы M-MLV и AMV и обладает высокой чувствительностью. Поставляется с оптимизированным буфером (10x Reaction Buffer).
Температурный оптимум составляет 37-42° С, однако обратная транскриптаза HIV сохраняет активность при температуре 50° С, а также при проведении реакций длительностью более 1 часа. В связи с этим обратная транскриптаза HIV является идеальным выбором для работы с проблемными матрицами, например G/C-богатыми, а также для оценки противовирусных агентов.

rTth DNA Polymerase configured for reverse transcription – каталожный номер N8080098 (500 единиц)
Рекомбинантная ультра-чистая rTth ДНК-полимераза (94 кДа) подходит для амплификации РНК-матриц, так как обладает активностью обратной транскриптазы и ДНК-полимеразы в одной буферной системе. Поставляется с оптимизированным буфером.
Обратная транскрипция осуществляется при температуре 60-70° С. В связи с этим данный фермент подходит для матриц с высоким содержанием G+C или со вторичными структурами.

rTth DNA Polymerase, XL
Ультра-чистая термостабильная рекомбимнантная ДНК-полимераза rTth, XL обладает 5’-3’ и 3’-5’ экзонуклеазной активностью, обеспечивает точность и эффективность амплификации, а также более высокий выход длинных продуктов. Поставляется с оптимизированным буфером (XL Buffer II).
1) 400 единиц – каталожный номер 8080187;
2) 2400 единиц – каталожный номер 8080188

Удаление ДНК

DNA-free™ DNase Treatment and Removal Reagents – каталожный номер AM1906
Набор реагентов содержит RNase-free DNase I, оптимизированный 10х буфер и новый реагент для удаления DNase и двухвалентных катионов. Набор рассчитан на проведение 50 реакций.

Основные характеристики:

• Безопасное удаление ДНК-примесей и двухвалентных катионов из образцов РНК;
• Не требуется органической экстракции, добавления ЭДТА или тепловой инактивации;
• Реакция очистки осуществляется за 3 минуты.

TURBO DNA-free™ – каталожный номер AM1906
Набор реагентов содержит Turbo DNase, оптимизированный 10х буфер и новый реагент для удаления DNase и двухвалентных катионов. Набор рассчитан на проведение 50 реакций.

Основные характеристики:

• Turbo DNase – более эффективный фермент, чем DNase I дикого типа;
• Безопасное удаление даже следовых количеств ДНК-примесей и двухвалентных катионов из образцов РНК;
• Не требуется органической экстракции, добавления ЭДТА или тепловой инактивации.

DNAZap™ – каталожный номер AM9890
Набор содержит два компонента, каждый из которых по отдельности являются безвредным. Однако при смешении они образуют реагент для деградации нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). Набор является идеальным для очистки ПЦР-пробирок (не ингибирует последующие ферментативные реакции), поверхностей приборов и рабочих поверхностей, пипеток, центрифуг и другого лабораторного оборудования.

Наборы реагентов для ОТ-ПЦР

GeneAmp® Thermostable rTth Reverse Transcriptase RNA PCR Kit – каталожный номер N8080069
Набор реагентов предназначен для детекции и анализа уровня экспрессии генов на уровне РНК.

Основные характеристики:

• Обратная транскрипция и амплификация осуществляются с помощью одного фермента, что обеспечивает более высокий выход продукта;
• Высокая температура обратной транскрипции (60 – 70 °С) увеличивает специфичность, делая набор идеальным для работы с РНК с высоким содержанием G+C или с РНК, содержащей вторичные структуры;
• Эффективные синтез кДНК и последующая амплификация для любой РНК.

TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription Kit – каталожный номер 4366596 (200 реакций) или 4366596 (1000 реакций)
Набор реагентов содержит все необходимые компоненты для обеспечения оптимальной производительности при проведении TaqMan® MicroRNA анализа. Компоненты набора, используемые с ОТ-праймерами, позволяют конвертировать miРНК в кДНК.

Основные характеристики:

• Высокая специфичность;
• Высокая чувствительность (требуется от 1 до 10 нг тотальной РНК или эквивалент);
• Быстрота и простота выполнения эксперимента.

GeneAmp® Gold RNA PCR Reagent Kit and Core Kit
Набор реагентов оптимизирован для проведения одношаговой РНК-ПЦР. Обеспечивает возможность проведения двухшаговой РНК-ПЦР, лучше чем другие наборы реагентов.
Система основана на применении 1 буфера и 2 ферментов: MultiScribe™ Reverse Transcriptase для обратной транскрипции и AmpliTaq Gold® DNA Polymerase (горячий старт) для амплификации.

Основные характеристики:

• Высокие чувствительность, специфичность и выход продукта;
• Простота использования и гибкость;
• Возможность мультиплексирования – сохранение времени и реактивов.

1) GeneAmp® Gold RNA PCR Core Kit – каталожный номер 4312765 (100 реакций объемом 50 мкл)
Данный набор содержит: обратную транскриптазу MultiScribe™, ДНК-полимеразу AmpliTaq Gold®, 5x ОТ-ПЦР буфер, RNase - ингибитор, 100mM DTT, смесь dNTPs (10mM), 25mM MgCl₂, random hexamers и Oligo d(T)₁₆ – праймеры.
2) GeneAmp® Gold RNA PCR Reagent Kit – каталожный номер 4308208 (100 реакций объемом 50 мкл)
Данный набор содержит: GeneAmp® Gold RNA PCR Core Kit и GeneAmp® RNA PCR Control Kit (контрольная РНК pAW109, праймеры DM151 и DM152).

GeneAmp® RNA PCR Kit and Core Kit
Набор реагентов подходит для выполнения различных исследований, включая приготовление кДНК на матрице РНК и анализ экспрессии генов на уровне РНК.

Основные характеристики:

• Непревзойденная чувствительность (обратная транскрипция и амплификация кДНК в одной пробирке);
• Отсутствие необходимости выделения большого количества РНК и проведения Нозерн-блот анализа;
• Простота использования.

1) GeneAmp® RNA PCR Core Kit – каталожный номер N8080143 (100 реакций объемом 100 мкл)
Данный набор содержит: обратную транскриптазу MuLV, ДНК-полимеразу AmpliTaq, 10x ПЦР буфер II, RNase - ингибитор, 100mM DTT, dATP, dCTP, dGTP, dTTP, 25mM MgCl₂, random hexamers и Oligo d(T)₁₆ – праймеры.
2) GeneAmp® RNA PCR Kit – каталожный номер N8080017 (100 реакций).
Данный набор содержит: GeneAmp® RNA PCR Kit и GeneAmp® RNA PCR Control Kit (контрольная РНК pAW109, праймеры DM151 и DM152).

GeneAmp® EZ rTth RNA PCR Kit – каталожный номер N8080179 (100 реакций объемом 50 мкл)
Набор реагентов идеально подходит для детекции и количественного анализа клеточной РНК, РНК вирусов и скрининга библиотек при проведении одношаговой ОТ-ПЦР.
Данный набор содержит: rTth ДНК-полимераза (500 единиц; 2.5 ед/мкл), 5x EZ буфер (1.0 мл), 10mM dNTPs (по 320 мкл dATP, dCTP, dGTP, dTTP), 25mM Mn(OAc)₂ (1.0 мл), контрольная РНК pAW109 и контрольные праймеры.
Входящая в состав набора рекомбинантная ультра-чистая rTth ДНК-полимераза (94 кДа) обладает активностью обратной транскриптазы и ДНК-полимеразы в одной буферной системе.

Основные характеристики:

• Подходит для матриц с высоким содержанием G+C или со вторичными структурами;
• Минимизация контаминации;
• Высокая чувствительность;
• Отсутствие необходимости проведения Нозерн- и Саузерн-блот анализов;
• Быстрота и простота использования

Дополнительно можно приобрести rTth ДНК-полимеразу (500 единиц; 2.5 ед/мкл), 5x EZ буфер (1.0 мл) и 25mM Mn(OAc)₂ (1.0 мл) – каталожный номер N8080178.

Наборы реагентов для контроля ПЦР

GeneAmp® RNA PCR Control Kit – каталожный номер 4308238
Набор реагентов служит в качестве положительного контроля для мониторинга ПЦР на матрице РНК и может выступать в качестве внутреннего стандарта для определения количества мРНК. В состав набора входят контрольная РНК pAW 109 и контрольные праймеры DM151 и DM152. Размер амплифицируемого продукта составляет 308 пар оснований.

GeneAmplimer® pAW 109 RNA – каталожный номер N8080037
Набор реагентов может использоваться в качестве положительного контроля для мониторинга ПЦР на матрице РНК, а также в качестве внутреннего стандарта для определения количества мРНК некоторых цитокинов, лимфокинов, атероскрелотических факторов и др: TNF, IL-1, IL-1beta, IL-2, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-R, липопротеины низкой плотности, HMG, LPL и M-CSF.